现在你可能已经听说了Addgene的病毒式服务但你知道Addgene也进行独立研究吗？自2016年推出病毒服务以来，Addgene的研究团队一直在积极研究改进病毒载体生产的方法。无论是重新设计病毒包装质粒，研究不同的病毒生产策略，还是开发新的数据分析方法，我们团队的目标都是为科学家提供新的工具和协议，让他们能够轻松地将其纳入自己的实验室。本周，我们很高兴地宣布，我们的第一项研究结果已经提交，可以访问在bioRxiv这里.
AAV2与包装细胞的细胞膜相互作用
包装时腺相关病毒载体（AAV）188完整比分直播并非所有血清型都相同；虽然一些血清型通常高产，但对于其他血清型，如AAV2，低产率是标准。在AAV2的情况下，这被认为是由于病毒颗粒对包装细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖具有亲和力(范登伯格，2010年).病毒颗粒与细胞膜结合，通过内吞作用进入细胞，而不是释放到细胞培养上清液中。在我们的研究中，我们的目的是通过用内吞抑制剂蔗糖处理包装细胞来防止AAV2病毒颗粒被摄取。
以前的工作Stoneham等人。证明蔗糖处理后AAV2进入靶细胞被阻断。此外，一些报告表明，用蔗糖或其他渗透压细胞处理以诱导高渗的细胞显示出增强的单克隆抗体产生（Oyaas，1989；Ozturk和Palsson，1991年;哦，1993年)提高腺病毒的产量(Coroadinha，2006年)和逆转录病毒生产系统(沈，2011).据我们所知，高渗压对AAV产量的影响尚待研究。
蔗糖补充增加的产量具有血清型特异性
在我们的研究中，我们观察到低剂量的蔗糖提高AAV2产量约1.8倍，而不影响细胞活力。这种效应似乎是血清型特异性的，因为蔗糖处理也提高了AAV2衍生物rAAV2-retro的产量，但对AAV5产量没有影响。我们进一步表明，这种效应对蔗糖没有特异性，但是可适用于其他糖，如山梨醇。由于山梨醇已经是AAV配方缓冲液中的一种常见赋形剂，这种糖可能是希望提高AAV产量的实验室更具吸引力的选择。鉴于科学家依赖我们的AAV制剂进行广泛的下游应用，我们想确定这种补充剂on策略不会影响最终病毒制剂的纯度或传染性。通过糖检测分析，体外我们表明，未经处理的病毒制剂和经蔗糖处理的病毒制剂在纯度或传染性方面没有差异。
尽管观察到对我们的总产量有积极影响，但我们无法证明这些结果实际上是由于内吞作用受损所致。设计用于测试荧光染料的内吞作用和荧光信号转导的平行分析表达绿色荧光蛋白的AAV颗粒我们没有观察到未经处理和蔗糖处理的细胞之间有任何差异。虽然我们无法推断相关的机制，但我们仍然相信这些结果将对研究界有益。
那么，我们为什么这么激动？首先，我们相信这种方法可以被向量核和实验室采用，作为一种简单且廉价的方法来提高AAV产量。虽然我们只调查了3种血清型，但这种方法可能对其他AAV血清型的宿主有益；用不同的衣壳测试这种方法将是令人兴奋的。最重要的是，由于我们的AAV产量得到了提高，我们将花费更少的时间和资源重新补充现有库存，并花更多的时间为研究界提供新材料。
工具书类
1.渗透压对逆转录病毒载体产生的影响：载体稳定性的增强188完整比分直播生物技术与生物工程94.2 (2006): 322-329. PubMedPMID:16528756.
2.Steve KW等人，“通过渗透压和丁酸钠大量产生抗体。”生物技术与生物工程42.5 (1993): 601-610. PubMedPMID:18613082.
3.Oyaas，K.等人，“高渗应激条件下杂交瘤生长和抗体产生。”动物细胞生物学及生物加工技术进展(1989): 272-278.
4.Ozturk、Sadettin S.和Bernhard O.Palsson。培养基渗透压对杂交瘤生长、代谢和抗体产生的影响生物技术与生物工程37.10 (1991): 989-993.PubMed采购经理人指数：18597326.
5.沈春芳和阿明·卡门。HEK 293细胞在生长期（而非产生期）的高渗压可促进腺病毒的产生生物技术杂志157.1 (2012): 228-236. PubMedPMID:22154564.
6.斯通汉姆、夏洛特A、迈克尔·霍林斯海德和阿明·哈吉图。“网格蛋白介导的腺相关病毒/噬菌体的内吞作用和随后的内溶酶体转运。”生物化学杂志（2012）：jbc-M112。PubMedPMID:22915587公共医疗中心PMCID：PMC3476254.
7.Vandenberghe，Luk H.等人，“腺相关病毒制造过程中功能载体向培养基中的有效血清型依赖性释放。”人类基因治疗21.10 (2010): 1251-1257.采购经理人指数：20649475公共医疗中心PMCID：PMC2957237.
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