我们对我们与等位基因生物技术的新伙伴关系感到兴奋，这使研究人员能够沉积含有荧光蛋白mNeonGreen的质粒。这种荧光蛋白加入mTFP1和mWasabi，作为等位基因生物技术的荧光团，现在可以沉积在Addgene。这些是什么金宝搏app下载独特的，他们可以用来做什么？让我们看看！
mNeonGreen：一种黄绿色荧光蛋白
mNeonGreen是一种黄绿色荧光蛋白，源自海洋无脊椎动物的四聚体黄色荧光蛋白（LanYFP）文昌鱼lanceolatum在2012年。利用结构建模和结构引导的直接进化，Nathan Shaner和来自闪烁研究所、等位基因生物技术、佛罗里达州立大学、印第安纳大学和卡罗林斯卡学院的同事通过21个对LanYFP的替换和增强GFP (EGFP)型末端的添加开发了mNeonGreen。
mNeonGreen被报道为最亮的单体绿色或黄色荧光蛋白在时间。它比最常用的gfp和yfp亮1.5到3倍。其激发最大值为506 nm，发射最大值为517 nm。由于mNeonGreen波长位于绿色和黄色荧光蛋白波长之间，它可以用标准的绿色荧光蛋白滤光片或黄色荧光蛋白滤光片进行成像，而分别不减少或减少最小的发射读数。
mNeonGreen可作为融合标签广泛应用于从传统成像到FRET和随机单分子超分辨率成像等领域。mNeonGreen与其他常见荧光蛋白的序列相似性很小，因此可以用于其他荧光蛋白的免疫沉淀实验。金宝搏app下载
mTFP1:一种蓝绿色荧光蛋白单体
mTPF1是来自珊瑚的四聚青色荧光蛋白的单体版本例如羽珊瑚服务提供商．蛋白质CFP484。艾慧旺和他的同事来自阿尔伯塔大学和俄勒冈大学通过转换创建mTFP1E．杆菌有了基因库大约484个变体，包括一些潜在的四聚体断裂突变。然后，通过连续几轮诱变筛选文库中最亮的teal荧光蛋白，这些蛋白具有光稳定性，发射比高达480/530nm。他们得到了一种相对于CFP484共有31个氨基酸替换的蛋白质。因为激发和发射的最大值是红移的（分别为462nm和492nm），所以他们将其归类为teal而不是青色，并将其命名为蛋白质mTFP1。金宝搏app下载
研究人员建议使用mTFP1和445/30 nm激发滤波器、470 nm分束器和495/30 nm发射滤波器。这种组合导致相对于使用标准CFP集成像的mCerulean信号增加2.6倍。mTFP1可用作mCitrine和mOrange的FRET供体，或用于融合和FRET报告的活细胞成像。mTFP1对pH值的生理相关变化也不敏感。
mWasabi：一种亮绿色荧光蛋白
开发mTFP1的团队进一步试图确定为什么该蛋白相对于其亲本蛋白CFP484会发生蓝移。他们与佛罗里达州立大学的科学家合作，使用了突变研究发现，特定的氨基酸变化更有利于蓝移．在这个过程中，他们确定了mWasabi，一种明亮的单体绿色荧光蛋白。
在体外，mWasabi的亮度是EGFP的1.6倍，具有光稳定性。它还具有窄的激发和发射峰（493 nm处的最大激发和509 nm处的最大发射），这使得它在多色标记中非常有用，尤其是在紫色范围内激发的荧光团。例如，mWasabi可用于蓝宝石（最大激发399 nm），因为它在400 nm时不会显著激发，而EGFP会。
关于这些蛋白质最值得注意的一点是它们是单体荧光蛋白。金宝搏app下载金宝搏app下载低聚化的荧光蛋白通常会影响融合蛋白的定位和/或功能。研究人员在荧光蛋白的C端和N端构建了22个不同的mTFP1融合体，发现融合蛋白定位于预期位置。对mWasabi的分析也得出了类似的结果。
我们希望这篇博文能帮助你了解为什么某些荧光蛋白最适合某些研究。如果您有包含mNeonGreen、mT金宝搏app下载FP1或mWasabi的质粒，希望与科学界分享，请质粒沉积在Addgene!
参考文献
Ai，Hui wang，et al.“克拉维藻青色荧光蛋白的单体、明亮和光稳定版本的定向进化：结构表征和在荧光成像中的应用。”生物化学杂志400.3 (2006): 531-540. PubMedPMID: 16859491. 公共医学中心PMCID:PMC1698604．
艾慧旺，等。蓝棒藻荧光蛋白的色调转移单体变体:颜色的分子决定因素的鉴定及其在荧光成像中的应用BMC生物学6.1(2008): 13。PubMedPMID: 18325109. 公共医学中心PMCID: PMC2292683．
Shaner，Nathan C.等人：“一种源自柳叶鳃口菌的明亮单体绿色荧光蛋白。”自然方法10.5 (2013): 407. PubMedPMID:23524392. 公共医学中心PMCID: PMC3811051．
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