在发现CRISPR / CAS系统之前，跨多个基因座的基因激活是艰巨的过程。当使用锌指蛋白或故事蛋白质时，必须为每个基因重新设计蛋白质，使得广泛的基因活化似乎是不可能的。然而，CRISPR / CAS系统的开发大大提高了基因激活的简单性：而不是需要每个基因座的蛋白质工程，CRISPR / CAS系统仅需要改变可编程导向RNA。
基因活化dCas9，也被称为CRISPRa，最初发表在2013年（Bikard等人，2013那Perez-Pinera et al.， 2013）。在未来的几年随后，创新方法大大提高CRISPRa，扩大其实用性和普及研究（Tanenbaum等人。，2014年那Konermann等人，2015年那查韦斯等人，2015年）。
最流行的CrispR激活方法
CRISPR激活使用dCas9，一种缺乏内切酶能力的CRISPR蛋白变体，结合基因不编辑基因组（Qi等，2013）。为了靶向特定序列，CRISPR / CAS系统依赖于与感兴趣顺序的引导RNA互补。结合后，Crispra Systems招募转录因子以增加基因表达。Crispra方法在其转录激活剂中变化：一些方法依赖于融合蛋白，而其他方法则在其他人自身重新设计CAS系统的组件。Suntag，Sam和VPR在初始DCAS9-VP64方法上所有显示出显着的改进，因此在寻找激活各种细胞系中的激活基因时，有多种选项可供选择。
dCas9-VP64
描述
CRISPR激活可通过与VP64，强大的转录激活域融合dCas9发生。通过dCas9的指导下，VP64募集转录机制的特定序列，导致靶基因调控。这可以引发或伸长期间使用以激活转录，这取决于序列靶向。
表现
DCAS9-VP64激活通常被认为是“第一代”CRISPR激活器。虽然它需要一个相对简单的构建体，但它表现出适度的基因激活水平，其中一些基因经历了2倍的激活水平。虽然其他方法已经能够实现更高的激活，但DCAS9-VP64非常适合需要适度的基因激活的实验。
协同激活中保（SAM）
描述
SAM使用特别设计的sgRNAs增加转录。这是通过创建与适体，其结合改造以MS2蛋白一个dCas9 / VP64融合蛋白进行。这些MS2蛋白再招附加激活域（HS1和p65）。
表现
当靶向单一基因时，SAM一致地显示与其他CRISPR激活剂相比最高水平的基因活化，使其成为基因激活实验的流行方法。然而，在多重基因调节（一次激活多种基因）的情况下，SAM表现出与其他流行激活方法（VPR和SunTag）相当的激活水平（查韦斯等人，2016）。
Suntag.
描述
SunTag使用重复肽阵列与VP64的多个副本融合的重复肽阵列而不是使用每个DCAS9的单个VP64副本。通过在每个感兴趣的位置具有多个VP64的副本，这允许每种靶向基因募集更多的转录机制。
表现
SunTag执行比第一代的活化剂更好，同时显示出比SAM较低的活化水平。这种方法的一个缺点是它的结构：它依赖于抗体链，其是相对较大的，并且不整个细胞持续表达。
vpr.
描述
VPR融合三方的复杂与dCas9激活转录。此复合物由在其他CRISPR活化方法，以及两个其他有效的转录激活因子（p65和RTA）中使用的活化剂VP64的。这些转录激活因子协同工作，招募的转录因子。
表现
通常，VPR被发现相比于SAM系统具有更高显著激活水平比初始dCas9-VP64活化剂，但较低的水平。它的激活水平类似SunTag的。该方法相对于其他显着CRISPR活化剂的一个优点是，它需要的融合蛋白，而不是依赖依赖gRNA设计（SAM）或肽设计（SunTag）的双组分系统。这简化其交付，使其成为CRISPR激活的共同选择。
CRISPR激活的新方法
虽然SAM，SunTag和VPR已成为CRISPR激活最常用的方法，研究在该地区继续发展。这些新方法还没有经过严格的对比其他CRISPR活化剂，但其最初的结果显示了基于CRISPR基因活化的承诺。
dCas9，CBP
在该方法中，dCas9融合于CBP，能够重排染色质结构的组蛋白乙酰转移域。这种方法已经示出更高的激活水平比SAM在遇到一些位点果蝇细胞系（Sajwan等人，2019）。
斯芬
SPH结合了SAM和SunTag激活因子的组件，将SunTag的表位标签与SAM中使用的P65-HSF激活域融为一体。已显示该方法激活基因2到3-比SAM、SunTag和VPR高（周等人。，2018）。
我们希望这可以帮助您选择了CRISPR激活为您的实验。祝你的实验！
参考文献
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