这篇文章是由客座博主，成员Addgene咨询委员会布罗德研究所基因干扰平台副主任约翰·多恩奇(John Doench)。
基因筛选项目可能是一项艰巨的任务，产生的结果只能用“巨大”来形容。但是，这样一个项目不应该轻率地进行。无论以阵列或集合的形式执行，当然都有材料成本，无论谁为它们买单。更重要的是，你的时间有机会成本;你花了几个月的生命投资，结果可能只是一张由随机数字组成的Excel电子表格，然后就会让你，好吧，悲伤。
为什么激酶组?
而适当设计的扰动-在使用CRISPR技术的屏幕从grna到敲除基因，都是必不可少的筛选成分，模型系统和分析方法对成功同样至关重要。有时，你可能会有一些阳性的控制基因来测试你的生物模型的有效性和你的试验的技术性能。但是，在许多以发现为导向的项目中，重点是这种表现型没有阳性对照——你已经开发了一个新的模型或新的分析方法，或者两者都有，你不知道涉及到什么基因。或者你不知道你的实验规模有多大。或者你没有足够的细胞来执行全基因组的扰动。因此，尽管有些人可能会争辩说，做某件事的唯一方法是做大的事情，但有些时候，更渐进的方法是谨慎的。
CRISPR kinome文库中有什么?
因此，我们很高兴提供针对这些人群的CRISPR库鼠标和人类激酶组。虽然基因组的任何子集都受到定义的限制，但kinome是一个注释良好的基因集合，可以为开发模型和测试模型的分析提供一个有用的起点。这两个库都是Addgene提供的两组库，每个激酶有4个gRNAs，因此每个基因可以有4个或8个gRNAs进行筛选。此外，这些池以两种矢量格式提供:all-in-one (lentiCRISPRv2lentiGuide只表达一个gRNA，用于已经有Cas9的细胞。每个库包含大约3000个grna，而在全基因组库中发现的grna有7万或更多，因此可以在更典型的组织培养规模下以集合格式进行筛选，同时仍然提供了真正生物学见解的潜力。
合并的和单独的质粒格式
这是Addgene图书馆的第一次，你也可以订购单个lentiGuide gRNA质粒以人类基因组为目标。这些质粒包含与合并文库第一个子集相同的3-4个gRNAs。个体质粒在筛选表型时很有用，例如细胞非自主效应，这些表型不适合在集合环境中进行筛选。个别质粒也将有助于成像或基因表达分析，需要单独筛选个别质粒。此外，该集合可用于挑选在合并屏幕中得分为命中的单个grna，以促进更快速的跟踪。
我们希望生物界会发现这些试剂是有用的。筛选快乐!
非常感谢我们的客座博主，John Doench!
约翰·多恩奇(John Doench)是Broad基因干扰平台的副主任。他妈妈总是告诉他，在完全正常的尺寸下，他的语言和手指是最棒的。
引用:
1.杜恩奇等。“优化了sgRNA设计，以最大化CRISPR-Cas9的活性和最小化脱靶效应。”自然生物技术(2016)．PubMedPMID: 26780180．公共医学中心PMCID: PMC4744125．
参考资料在Addgene博客188博金宝官网
- 学习使用CRISPR/Cas9进行全基因组筛查
- 听听约翰·多恩奇的建议吧gRNA设计
- 看看新闻方法使用CRISPR进行单碱基编辑
在Addgene.org上的资源
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