热质粒- 2020年10月

由各种各样的笨蛋

各种addgenies.2020年10月13日

每隔几个月，我们通过我们突出了存储库中的新质粒和病毒准备的子集热质粒的文章．这些文章提供了最近质粒沉积的简要总结，我们希望它们将使您更容易找到和使用您需要的质粒。如果你想写关于最近的质粒沉积请注册这里．

以下是你会在这篇文章中发现的:

用手指标记兴奋性和抑制性突触蛋白

从开创的日子加尔吉和Cajal.，神经科学家已经开发并改进了许多工具来挑剔脑部结构和功能的细节，并在每个工具的出现扩展我们的学习能力和理解人类大脑中860亿神经元的复杂互通。但研究突触联系和生理学尤其具有挑战性，因为它们的数量很大，通常很小，并且可以含有不同的神经递质。使用遗传编码的荧光蛋白与用mRNA显示器（Fingr金宝搏app下载s）产生的纤连蛋白内部，韩雪的实验室开发了AAV载体，以选择性地在大脑中可视化兴奋性和抑制突触。

使用AAV将绿色、红色、creu诱导型和逆转录病毒FingR基因变异传递到小鼠体内。它们可以用于双色突触标记或特定神经群体的突触标记。

图1：不同FingR结构和实验结果的示意图。图片来源于Bensussen等人，2020年。

FingR构建的靶向突触支架蛋白PSD95和gephyrin分别标记兴奋性和抑制性突触。一旦在神经元中表达，FingRs就会与内源性突触蛋白结合，使其定位于突触，并将来自细胞其他区域的外来荧光最小化。通过将表达不同荧光蛋白的载体结合起来，研究人员可以在不受抗体标记限制的情况下探索突触金宝搏app下载的整合和连接。这就为在活的有机体内跟踪海马成年颗粒细胞突触成熟模式的实验，这在以前是不可能的。

Bensussen S等人，iScience 2020。https://doi.org/10.1016/j.isci.2020.101330

Split-wrmScarlet是一种荧金宝搏app下载光蛋白系统秀丽隐杆线虫

通过曾珍妮弗

金宝搏app下载传统上引入的荧光蛋白（FPS）秀丽隐杆线虫染色体外排列可能会由于过度表达而导致伪影。CRISPR可以将FP基因插入到靶基因的天然位点，但会引入大量的基因变化C。elegans.由于它需要较低的双链模板，而不是更有效的难度单链寡脱氧核苷酸供体（SSODN）．那么如何使用CRISPR来引入大型FP基因C．elegans.还是通过使用分割FP方法。

split- wrmscarlet是一种新的分裂红色FP，在蠕虫中它的亮度是split- sfcherry 3的三倍。它是由玛丽亚·英加拉莫，杰罗姆·古多，辛西娅·凯尼恩卡利科生命科学的同事。与许多拆分fps一样，split-wrmscarlet由两个不荧光的两个fp片段组成。当两件碎片聚集在一起时，他们保险丝和荧光。团队工程师C．elegans.用于表达WRMSCARLET的细胞系_1-10不与任何其他细胞蛋白质结合。他们使用带有ssODN模板的CRISPR来引入小的wrmScarlet₁₁它的长度小于60 nt来标记目标蛋白。该团队通过靶向6个蛋白质产品有不同定位的不同基因来验证该工具。

图2:Split-wrmScarlet标记不同亚细胞位置的蛋白质。图像来自Goudeau等人，2020年。

Goudeau，J.Biorxiv 2020。https://doi.org/10.1101/2020.07.02.185249.

用组蛋白融合荧光定时器预测细胞周期长度

通过凯特哈顿德马奥

细胞周期的研究试图了解细胞的发育、再生和某些疾病状态。然而，很难观察到细胞周期在活的有机体内，特别是当细胞迁移或位于深层组织时。为了解决这个问题，上秦郭和耶鲁大学的同事融合了一种变色的荧光定时器（FT）蛋白，允许在活细胞中观察的组蛋白H2B。荧光定时器在合成时发出蓝光，并且在几个小时后，构象变化会导致蛋白质发光红色。H2B-FT-red持久是持久的，并且在原发性小鼠胚胎成纤维细胞中显示出84小时的半衰期。该融合蛋白可用于通过检查蓝色至红细胞的比例来确定细胞周期长度。正在进行快速细胞循环的细胞具有高蓝色的红色比，而具有长或缓慢循环的细胞比蓝色更红色（伊士曼等人，2020）。

图3:BaF3细胞被H2B-FT病毒转导，并在不同浓度的IL-3中生长。在高浓度IL-3培养的细胞表现出高比例的蓝色荧光，表明细胞增殖。维持在无IL-3培养基中的BaF3细胞仅表现出红色荧光。图片来自伊士曼等人，2020年。

研究人员在急性髓性白血病中对胚胎发育的几种情景从胚胎发育中进行了几种情况，并展现了H2B-FT的表达一致地预测这些不同细胞类型的细胞周期速度。在一个实例中，H2B-FT在鼠B细胞（BAF3）中表示，这取决于IL-3以增殖。用低剂量IL-3培养的细胞显示出扩增减少，并且通过流式细胞术测量的红细胞具有更多的红细胞。在高IL-3中生长的细胞显示出大多是蓝色荧光，表明快速细胞周期。含有IL-3退出的细胞完全是红色，因为它们不能增殖。

伊斯曼等。小区报告2020。https://doi.org/10.1016/j.celrep.2020.107804

CRISPR角

通过曾珍妮弗

以下是最近CRISPR质粒的一些亮点。要找到Addgene提供的所有CRISPR质粒，请访问我们的CRISPR质粒和资源页面．

CasPhi是70 kDa Cas蛋白专门在巨大的噬菌体基因组中鉴定。它在体外、人类和植物细胞中都有活性。它的小尺寸为蜂窝传输提供了优势。

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sc++是一个密码子优化，工程犬链球菌Cas9核酸酶这是一个广泛的5'-nng-3'pam。

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人甙库是一种新的慢病毒克里普尔特图书馆靶向人类糖基转移酶基因以及其他与细胞糖基化有关的蛋白质。

在Addgene获取图书馆

CasRx是一个RNA靶向Cas系统可用于果蝇melanogaster。

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Cas Hybrid for multiple Editing and screening Applications (CHyMErA)敲除文库在单个U6启动子下表达杂交Cas9-Cas12a gRNAs。的相似和双靶点杂交gRNA文库可用于识别副葡萄球菌之间的遗传相互作用。的外显子缺失杂交gRNA文库删除人类选择性盒式外显子并用选择性外显子破坏基因。