我们一直在寻找改进装运流程的方法描述干冰短期储存如何改变样品pH值的出版物，我们想知道我们在运输过程中用来冷冻病毒的干冰是否会对样本产生影响。因此，我们设计了一些实验，以确定我们的管道是否可以渗透到一氧化碳2.从干冰中释放，以及这是否会影响我们病毒样本的pH值。请继续阅读，了解干冰对水样本的影响，特别是干冰对病毒样本的影响来自Addgene的病毒．
要旨当前位置有好消息，也有坏消息。坏消息是一些管子的o形圈实际上是可渗透的一氧化碳2.在低温下（-80°C） 一旦进入管道，管道一氧化碳2.可以改变液体样品的pH值。好消息是，这种影响是可逆的，并且可以防止pH值的变化。如果您计划在干冰上运输或接收干冰上的样品，请记住此信息-这可能会阻止您看到一些意想不到的结果。
测量样品的pH值:我们做了什么
为了测量样本的pH值，我们使用了一种细胞培养基溶液，该溶液经过缓冲并含有pH指示剂酚红。我们将样本冷冻在-80°C的冰箱中，然后将其移至一个封闭的干冰储存容器中48小时（以复制我们的病毒运输方式），它们将暴露在一个封闭的环境中一氧化碳2.(来自干冰)。48小时后一氧化碳2.然后，我们将样品在室温下解冻，并使用液体溶液的颜色和pH值纸来测量pH值。我们将干冰储存的样品与仅在-80°C冰箱中储存且未暴露的对照样品进行了比较一氧化碳2./干冰。所有样本一式两份。
我们发现
并不是所有的管子（或者更确切地说，不是所有的O形圈）都能渗透到空气中一氧化碳2.在低温下，我们测试了两种不同类型的管子：我们用来储存的管子慢病毒还有我们用来储存的那些AAV．我们的结果显示，一旦解冻，保存在慢病毒管中的样品的pH值不会受到影响(图1)。然而，一旦解冻，我们的AAV管中储存的样品的pH值会大幅降低（从7.4降至5.0）(图1）．
值得注意的是，pH值的变化仅在溶液解冻时发生，因为一氧化碳2.当样品冷冻时，限制在管顶空间。解冻后样品界面处可见pH值逐渐变化，这一点很清楚(图2).解冻前，所有样品的控制pH值均为7.4，如颜色所示（数据未显示）。
接下来我们做的是：给管子排气
然后我们测试在解冻之前是否放气一氧化碳2.因此，从顶部空间缓解干冰储存的pH值影响。为此，我们将样品储存在干冰上72小时，然后通过完全去除空气使管道通风盖上盖子，将试管竖直培养30秒，然后在解冻前重新取出试管。我们比较了通气管和非通气管与未暴露于干冰的对照组。
排气有帮助吗？
我们发现，30秒的排气减弱了干冰上储存引起的pH值变化(图3）．然而，30秒不足以阻止任何pH值的变化，因为我们仍然观察到pH值有轻微的变化(从7.4到6.8)。较长的排气时间可能足以使样品恢复到原来的pH值。
把它放回冰箱怎么样？
然后，我们测试了在干冰上储存后，将试管放回-80°C冷冻柜是否允许一氧化碳2.离开试管，防止解冻后pH值发生变化(图4）．为了测试这一点，我们将试管冷冻在-80°C，然后将它们移到干冰上封闭储存48小时。然后我们将试管移回-80°C的冰箱中，在0到96小时之间进行不同的恢复周期。我们将这些样品与仅在-80°C保存的对照样品进行了比较。在指定的潜伏期后，我们解冻试管，并测量pH值。
我们发现，恢复时间至少为96小时的试管与从未在干冰上储存/暴露的对照试管的pH值相同一氧化碳2.(图5).基本上一氧化碳2.进去后一氧化碳2.熄灭了。
结论和处理建议
结论和处理建议并非所有O形圈都能在-80°C下最佳工作。对于干冰上运输的样品，这可能会影响样品的pH值，这可能会对样品的含量产生一些影响。例如，一项研究发现干冰储存影响抗体的性能，因为pH对蛋白质稳定性的影响(Murphy et al.， 2013)。然而，我们的溶液中的pH值变化是短暂的，一旦管道打开并与周围空气恢复平衡，pH值就会恢复正常。我们没有证据表明pH的瞬时变化影响AAV功能。此外,另一项研究在一系列pH值暴露后测试AAV的传染性．他们表明，暴露在pH值低至2.5的2小时中，AAV的传染性没有改变(Potter等人，2014)。他们还表明，即使暴露在pH值5.1的环境中24小时也不会改变病毒的传染性。然而，暴露于pH值5.1 3周后，传染性显著降低(Potter et al.， 2014)。
根据我们的结果和其他地方报告的结果，我们建议您在收到来自Addgene的AAV后，在解冻前将AAV储存在-80°C下96小时。然而，如果这是不可能的，我们建议在解冻前将试管通风至少30秒，并在24小时内使用解冻的病毒。
参考文献
1.Murphy BM，Swarts S，Mueller BM，van der Geer P，Manning MC，Fitchmun MI.干冰运输或储存后的蛋白质不稳定性.Nat方法.2013年4月；10（4）：278-9.PubMedPMID:23538862．
2.Potter M, Lins B, Mietzsch M, Heilbronn R, Van Vliet K, Chipman P, Agbandje-McKenna M, Cleaver BD, Clément N, Byrne BJ, Zolotukhin S.重组腺相关病毒载体的简化纯化方案。Mol Ther Methods Clin Dev. 2014 Aug 13;1:14034。PubMedPMID: 26015974公共医疗中心PMCID: PMC4420252
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