在Addgene，情况确实如此我们的使命为了方便你们分享质粒。为了实现这一目标，我们将把您存放在我们这里的任何质粒存档，并将它们分发给世界各地的学术和非营利机构的科学家。而且，存款是免费的!当我们旅行去和科学家们讨论如何帮助他们共享质粒时，我们得到了许多关于沉积过程如何工作的问题。为了让你更容易一点，我们写了这篇文章，作为在线存款过程的一步一步的指导。
要在线储存质粒，你需要使用Addgene创建一个帐户在开始这个过程之前。
在您登录您的帐户后，您可以通过点击“开始存款在沉淀质粒菜单中:
输入文章信息
如您所见，启动存款时有三个选项:
1.你可以“从已发表的文章中提交质粒”:这个选项允许您快速地将您的质粒与您描述它们的原始出版物联系起来。像在PubMed上搜索一样搜索你的文章并选择适当的出版物。这份出版物将被列在最终质粒页面的顶部，科学家将被要求在使用你们的质粒时引用这篇文章。
2.你可以“提交出版前或未出版的作品”Plasmids”: Addgene鼓励提交前置质粒，这样当论文发表时就可以使用了。质粒可以与同行评审的手稿或预印本相连。在预印本提交的情况下，我们很高兴更新出版信息，一旦手稿发表在同行评审期刊。要开始这个过程，只需输入质粒的一般描述或输入你的预印本标题并选择你想要的分布状态:
- 出版:我们将启动我们的MTA流程并执行标准的质量控制，但在您更新我们的出版信息或允许分发之前，我们不会提供质粒。
- 分发等待质量控制:你们的质粒一旦通过我们的标准QC程序和MTA批准，就可以分发了。请注意，质粒加工需要4-6周。
3.使用我们的电子表格提交质粒：电子表格选项推荐用于沉积15个或更多类似的质粒(例如，相同主干的gRNAs)。我们的电子表格包含与我们需要的质粒数据相对应的列;您可以将您的信息直接复制并粘贴到文件中。这个文件可以通过电子邮件发送到deposit@addgene.org连同你的基因库文件，质粒序列和/或地图。我们可以接受任何格式的序列文件。
在你的文章中添加质粒
在您选择您的出版物或输入您的描述后，下一页将允许您添加质粒到您的文章:
在文章页面，输入与该沉积物相关的每个质粒的名称、类型和描述说明如下:
1.的名字-我们鼓励使用描述性的质粒名称使用出版物上列出的人名。您的质粒的别名可以添加在后面的页面。
2.类型-请从下列描述中选择您的质粒:
- 编码一个插入:
克隆质粒克隆进一个基因或蛋白质编码序列的质粒
- 编码gRNA /成分
内含一个gRNA或shRNA序列的质粒。grna用于指导CRISPR / Cas9到合适的基因组位置成分用于敲除与shRNA序列互补的mrna的表达。
- 空的支柱
为克隆或插入基因而设计的质粒。空的骨干通常包含通过克隆附加到新插入物上的表位标签或融合蛋白。
- 编码多个插入
一个编码多个插入的质粒可以包含多个基因或小的非编码rna。
＊注:如果您将储存多个质粒，并希望以电子表格形式发送您的质粒信息，请通过电子邮件与我们联系deposit@addgene.org
特殊情况
特殊情况请电邮至deposit@addgene.org或+ 1 (617) 225 - 9000如果你的质粒属于下列特殊情况之一:
- 集中库
一个集中库是一组质粒，所有构建的主干相同，只是在基因/插入不同。汇集的DNA库通常以液体DNA的形式提供与将文库中的所有质粒放在一个试管中。在一个汇集的文库中，独特的质粒的数量从几百个到几百万个不等。合并的库必须通过下一代测序进行验证。请电邮至deposit@addgene.org或+ 1 (617)225 - 9000如果你想通过Addgene分发你的池库。
- 菌株
菌株你已经创造出来的和你正在沉淀的质粒的使用所必需的物质可以通过Addgene进行分配。我们需要关于如何验证你的菌株特有的基因组改变的信息。请电邮至deposit@addgene.org或+ 1 (617)225 - 9000如果你想通过Addgene传播你的菌株。
3.描述-请注明克隆到您的质粒中的基因，质粒中包含的任何标签或融合蛋白，任何突变，以及质粒的预期用途。
一旦你已经命名和描述了你储存的所有质粒，你应该点击“输入数据”按钮开始输入你的质粒的具体信息。
输入质粒信息
在余下的过程中，您将在下面描述的页面中输入质粒数据。
如果你要存放集合库或细菌菌株，请联系我们+ 1(617) 225 - 9000。
你可以通过输入适当的数据并按“保存并继续下一步”(下方截图底部的绿色按钮)或你可以依次完成这些页面点击保存按钮点击页面顶部的适当框，跳转到不同的页面。
箴提示!
在移动到另一个页面之前，一定要按下页面底部的蓝色“保存”按钮，这样你输入的任何数据都不会丢失。
1.序列、映射和文件:
请提供任何完整或部分质粒序列和任何矢量图。序列数据越多越好。我们强烈建议您上传完整的序列数据。注意，完整的质粒序列可以组装或理论上-它不需要完全通过测序来验证。
上传任何支持文件，这将使科学家更容易利用你的质粒(这些可以是协议，GenBank文件，等等)。
2.基因和插入
*注意-此页面将不会出现为空的主干
请输入您的插入物中包含的任何基因的名称以及插入物的总大小。您可以选择基因或插入序列来自的物种，并包括与它相关的GenBank ID。输入此信息将填充与您的插入的可能的Entrez基因匹配的列表。如果它出现在Entrez基因列表中，请选择合适的基因，因为这将使其他科学家更容易找到与你的质粒相关的信息。
箴提示!
要让Entrez基因列表自动生成正确的基因，最好在“基因/插入”框中输入完整的NCBI官方基因名称。一旦您从列表中选择了合适的基因，保存您的进度，然后您可以根据需要修改基因/插入和替代名称框。
使用“相关突变/删除”框，使用标准突变符号描述插入中的任何突变。请注明氨基酸的变化以及这种变化的任何功能后果。例如，“突变的天门冬氨酸123到赖氨酸(D123K)，降低了钙的生物传感器亲和力。”
请描述任何标签或融合(例如。他的国旗,EGFP等)。使用下拉菜单指示标签是在N端还是C端，是存在于主链中还是插入的一部分(包含在用于将插入克隆到载体主链的限制位点内)。
作为我们质量控制过程的一部分，我们将顺序功能，您的注释在这一页。
3.克隆信息:
请输入您克隆插入的矢量主干的名称，并在适当的方框中填写矢量主干制造商、矢量主干大小、矢量+插入的总大小、对矢量主干所做的任何修改以及矢量类型。
箴提示!
通过Addgene请求的骨干在“骨干制造商”框中引用Addgene ID。
载体类型应该描述你的质粒打算如何使用。例如，如果你的质粒被设计成允许你产生大量的插入大肠杆菌，那么这是a细菌表达向量。如果您的质粒可以分为多个类别，请检查所有适当的类别(例如。f或者是用于哺乳动物细胞的慢病毒载体，检查一下慢病毒和哺乳动物表达）.这些信息会让科学家更容易找到你r质粒的类型。
如果你的质粒有插入物，系统会提示你如何克隆插入物-使用的克隆方法，使用的限制性内切酶(如果适用)，以及引物可以用来对插入进行排序(将引物名称和序列直接输入框中，如下图所示)．这些信息将极大地促进Addgene的质量控制过程，并将使科学家更容易使用您的质粒。
输入克隆信息，描述你的基因是如何被插入到质粒骨干中的，以及可以使用什么引物来验证，如下所示:
4.增长和地理分布:
请说明Addgene和其他科学家如何繁殖你的质粒。准确的信息将极大地促进沉积过程，并允许其他研究人员更快地访问和使用您的质粒。
只要有可能，我们就在标准克隆株DH5α中繁殖质粒。请说明您的质粒是否不能在DH5α中繁殖。对于具有高度重复序列的质粒(在细菌中易于重组)，例如慢病毒，逆转录病毒,AAV质粒，我们推荐内稳定的压力．对于含有ccdB基因的质粒，例如网关向量，我们推荐ccdB Survival应变．
5.验证
在这个页面上，你可以看到最终的质粒页面的预览，一旦你的质粒在网上可用，就会出现在Addgene的网站上。请检查这一页上的所有信息以确保它是正确的。通过使用页面顶部的链接导航到前面的页面，您可以轻松地更新信息。
一旦您对质粒信息感到满意，点击绿色的“保存验证数据并返回到文章”按钮，返回到列出该沉积的所有质粒的表格。然后你可以在你的沉淀物中输入下一个质粒的信息。
箴提示!
如果你有多个具有相同基因或载体骨干的质粒，你可以通过从下拉菜单中选择要复制的质粒并点击蓝色的“复制”按钮，从沉积中的先前质粒中复制一些信息。
注意* -“复制”按钮只有在您输入了第一个质粒的信息后才会出现，可以在每个单独的页面(基因和插入、克隆信息、生长和分布)上使用。
一旦你完成了所有质料的数据输入，返回到添加质料页面，点击绿色的“我完成了数据输入”。“申请存款包”按钮。
点击此按钮将允许您选择您希望存放的质粒，将质粒与首席研究员(PI)关联，向我们提供您存放材料的邮寄地址，并同意我们的条款和条件。
一旦这个过程完成，您将收到我们的存款确认电子邮件与一个独特的存款ID。Addgene会寄给你一个包裹，里面有关于如何准备你的质粒的说明，以及你可以用来寄给我们你的质粒的预付运输材料。
当您的质粒到达Addgene时，我们将通知您我们已经收到它们，它们将进行我们的质量控制过程来验证你的质粒的关键特征。我们友好的Addgene科学家将通知您一旦您的质粒在线和研究社区可用。
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