蛋白质标签在20世纪80年代首次被描述，现在是科学家工具箱中最有用的物品之一。我们已经讲过了质粒101，标签可以帮助您确定感兴趣的蛋白质的定位，纯化它，或确定其表达水平，而不需要定制抗体。需要注意的是，标签可能会干扰蛋白质的定位和/或功能，因此必须仔细测试每一个被标记的蛋白质，以确保它保留原蛋白的属性。由于这个过程需要大量的时间和精力，马蒂Aldea合作者已经创建了一套“无害标签”(inntags)不太可能改变蛋白质的特性。
为什么我们需要新的抗原决定基标签?
像FLAG、HA和Myc这样的短表位标签可以采用许多不同的构象，从而可能与它们所标记的蛋白质相互作用并改变它们。事实上,最近的一项研究在400种蛋白质中，有20%的标记蛋白质的定位与未标记的蛋白质不同。这些发现的动力Georgieva et al。开发新的标签，其定义的3D结构不太可能危及蛋白质折叠和功能。利用生物信息学分析，他们还选择了其他关键特性，特别是高溶解度，对其他蛋白质的有限亲和性，以及对抗体的可及性。从最初的候选蛋白池中，他们从非脊椎动物系统中选择了12个候选蛋白域。初步测试表明IT5，IT6,IT10在细胞中表达良好，不形成不良聚集。
利用出芽酵母作为模型系统，Georgieva等人检验了其作用GFP融合到inntags或传统的FLAG、HA和Myc标记。令人印象深刻的是，与未标记的GFP过表达相比，IT6-GFP并没有减少酵母细胞的大小或活力，而其余的融合对这些参数有一些负面影响。IT5和IT6在免疫荧光和免疫沉淀两种应用中均表现出良好的结合效率，但传统标记均不适合这两种应用。
为了证明inntags确实是无害的，Georgieva等人创建了cyclin的标记版本Cdc28和伴侣Ydj1这两种蛋白质都显示出与其他多种蛋白质复杂的相互作用。同样，IT5和IT6融合后，细胞形态几乎没有变化。相比之下，Flag和HA标签对细胞大小和生长速度的影响尤其不利，表明它们破坏了蛋白质-蛋白质的相互作用。
如果你正在寻找一个蛋白质的标签，inntags IT5和IT6是一个很好的开始。这些标记很容易在多个常见应用程序中使用。由于其对天然蛋白质结构的影响有限，inntag可能成为检测蛋白质相互作用的选择标签，特别是在单分子或高通量应用。也许IT5和IT6甚至会取代我们更老的抗原决定基标签——只有时间才能证明!
参考文献
1.等。intags:用于标记无害蛋白质的小型自结构表位。自然方法（2015）．PubMedPMID: 26322837．
2.夏绿蒂等。免疫荧光和荧光蛋白标记显示哺乳动物细胞中的蛋白定位高度相关。自然方法10.4(2013): 315 - 323。PubmedPMID:23435261．
资源Addgene
得到了Inntag质粒
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