新建立的一体化载体建设体系CRISPR/ cas9介导的多重基因组工程现已问世这要感谢日本广岛大学的研究人员，他们描述了他们的新工具科学报告6月。
广岛大学的Tetsushi Sakuma说:“与ZFNs和TALENs相比，CRISPR/Cas9的多路复用特性是最具优势的特性之一。”“然而，目前还没有系统建立的方法来制造用于多重基因组工程的一体化载体。”
现在，他们填补了这个空白。佐久间和他的同事山本隆在他们最近的研究中描述，该构建系统为表达多达7个引导rna (gRNAs)的all-in-one CRISPR/Cas9载体提供了方便和效率。佐久间说，新系统还可以扩展到包括更多的基因座。
在人类细胞中证实了多重基因组工程
他们使用金门克隆方法将grna的表达盒串联成单个载体。他们进一步证明，他们的CRISPR/ cas9 nuclease和CRISPR/ cas9 nickase载体能够成功地靶向培养的人类细胞中的多个位点。
虽然还没有被证实，但他们说，基于早期的证据，载体也可能在动物胚胎中起作用CRISPR / Cas9质粒可以直接注射到老鼠体内进行基因组编辑。他们补充说，他们的系统也有可能应用于高效的病毒载体介导的多重基因组工程。
该系统为基因组的多重编辑提供了一种高效的靶向策略。它还允许同时激活和/或抑制多个基因，等等。研究人员现在计划将新工具用于更广泛的Cas9s，当它们被验证并准备就绪时，他们也将提供这些工具。
Sakuma说:“目前，该试剂盒只包括两个版本的Cas9，核酸酶和nickase，但我们现在在我们的系统中采用dCas9, dCas9- vp64和dCas9- krab。”“这肯定是同时修改多个基因表达的有力工具。”
有关如何应用新系统的详细信息，请参见山本和坂沼的协议．
参考:
使用all-in-one CRISPR/Cas9载体系统在人类细胞中的多重基因组工程。Sakuma T, Nishikawa A, Kume S, Chayama K, Yamamoto T. Sci众议员2014 6月23日;4:5400。doi: 10.1038 / srep05400。PMID: 24954249
- 在Addgene找到CRISPR/Cas9组装系统试剂盒在这里．
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