从我们开始病毒式服务2016年,我们在现成病毒载体的库存中添加了许多新工具。以下是我们在过去几个月发布的一些AAV。你也可以浏览我们的188完整比分直播整个AAV库存。
我们的新AAV包括:
- 表达EGFP的AAV血清型检测
- 钙传感器和GABA传感器
- 光遗传学
- 重组酶
- 还有更多!
控制AAV
对于许多AAV实验,我们建议在进行实验之前确认目标细胞中的血清型。同样,许多科学家已要求AAV样本用于测试目的。为了解决这一问题,我们最近发布了血清型测试AAV,它很小(20 ul)表达EGFP的AAV样品包装成各种血清型。该收集现已完成!pAAV CAG GFP(质粒37825)和pAAV hSyn EGFP(质粒50465)现在可在AAV1、AAV2、AAV5、AAV8、AAV9和AAV逆行中获得20份ul等分样品。您还可以请求所需的特定血清型,而不是接收包含所有血清型的试剂盒,因为这20份ul样品是单独分发的。
我们正在扩大我们的整个控制AAV库存,以使科学家能够获得广泛的启动子和荧光团,以进行验证和测试。我们将继续添加更多的控制,最近发布了这些控制:
- pAAV hSyn DIO EGFP(50457-AAV5):突触蛋白启动子指导广泛的神经元表达。
- AAV pCAG FLEX EGFP WPRE(51502-AAV5):CAG启动子指导普遍表达。
- pAAV-mDlx-NLS-mRuby2(99130 AAVrg):Dlx元件指导前脑GABA能中间神经元的表达。
- pOTTC1032-pAAV EF1a Nuc flox(mCherry)-EGFP(112677-AAV5和112677-AAVrg):EF1a启动子指导强而普遍的表达。这是一种依赖于Cre的开关,在没有Cre的情况下表达核mCherry,在有Cre的情况下表达核EGFP。
生物传感器AAV(钙传感器和GABA传感器)
钙传感器
Janelia最新的钙传感器(jGCaMP7)继续以钙动力学的形式用于监测神经元活动。(有关这项技术的更多详细信息,请参阅我们的博客文章AAV编码钙传感器综述).我们正在将这些病媒的数量扩大到更多血清型。我们目前包装了这些生物传感器的四种变体,它们针对特定参数进行了优化:
- JG7S是对动作电位最敏感的反应者。对于单个动作电位,相对于基线荧光,GCaMP7s的亮度约为GCaMP7f变体的两倍,约为GCaMP6s的5倍。
- JG7F是反应最快的变体。
- JG7b显示最亮的静息荧光,可用于小神经元过程(树突和轴突)的成像。
- JG7C在峰值荧光和静止荧光之间表现出高对比度(通过降低传感器静止荧光,同时保持高峰值荧光来实现)由于来自非活动神经元的背景荧光减少,因此可用于对大量密集标记神经元的信号活动进行成像。这种变体在约100个动作电位后亮度增加约12倍。其亮度约为GCaMP7f和GCaMP7s的两倍。
看到我们所有的生物传感器清单,并在下面查看我们的最新矢量:
- pGP-AAV-syn-jGCaMP7f-WPRE(104488-AAV8)
- pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7f-WPRE(104492-AAV8)
- pGP-AAV-syn-jGCaMP7c变型1513-WPRE(105321-AAV1)
- pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7c变型1513-WPRE(105322-AAV1)
γ-氨基丁酸传感器
主要抑制性神经递质g-氨基丁酸(GABA)的传感水平是了解该分子如何影响神经回路的有力方法。除了Cre依赖性GABA传感器外,我们最近还包装了一种组成性GABA传感器(见下文)。见我们所有的这里有GABA传感器AAV库存.
- pAAV.hSynap.iGABASnFR(112159-AAV1)
光遗传学
光遗传学仍然是操纵特定神经元的有用方法。我们最近从克里斯托弗·哈维的实验室包装了一种针对躯体的视蛋白(切蒂和哈维,2019年)“这种定位应该通过减少靶点附近非靶神经元轴突和树突的光刺激来提高影响测量的特异性。”
- pAAV-CamKIIa-ChrimsonR-mScarlet-KV2.1(124651-AAV9)
重组酶
通过交叉方法瞄准和操纵特定的、基因定义的神经元群体是一个不断发展的领域,我们的目标是通过增加重组酶和重组酶依赖性载体的数量来支持这一领域。我们最近发布了几种不同血清型的重组酶,并将继续扩大这一集合。值得注意的是,我们很高兴在AAV9和AAVrg中发布Flp依赖的Cre AAV。请参见我们的新增内容:
Cre载体
- pAAV-EF1a-fDIO-Cre(121675-AAV9、121675 AAVrg)
- 宾州大学(105553-AAV5)
Dre向量
- AAV phSyn1(S)-DreO bGHpA(50363-AAV5)
Flp向量
- pAAV-EF1a-mCherry-IRES-Flpo(55634-AAV1)
- pAAV-EF1a-Flpo(55637-AAV1)
188完整比分直播病毒载体即将到来!
这些载体应在未来几个月内打包并作为AAV提供。给我们发电子邮件或查看我们的网站访问它们!
控制
- pAAV-hSyn-hChR2(H134R)-EYFP(26973 AAVrg)
- pAAV-hSyn-hChR2(H134R)-mCherry(26976-AAV5)
- pOTTC1032-pAAV EF1a Nuc flox(mCherry)-EGFP(112677-AAV5)
钙传感器
- pGP-AAV-syn-jGCaMP7b-WPRE(104489 AAVrg)
- pGP-AAV-syn-FLEX-jGCaMP7b-WPRE(104493 AAVrg)
- pGP-AAV-CAG-FLEX-jGCaMP7s-WPRE(104495 AAVrg)
- pGP-AAV-CAG-FLEX-jGCaMP7f-WPRE(104496 AAVrg)
光遗传学
- pAAV hSyn Con/Fon hChR2(H134R)-EYFP(55645-AAV5)
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