188完整比分直播病毒载体101:病毒载体元素

由马西帕特里克

慢病毒转移、包装和包膜质粒的原理图

使用病毒载体的研究是有188完整比分直播益的原因,包括但不限于:帮助difficult-to-deliver DNA进入哺乳动物细胞,增加基因转导效率,允许通过病毒pseudotyping控制细胞被感染,和易用性向量克隆和修改。在最基本的层面上,病毒载体由一个病毒基因组组成,该188完整比分直播基因组已被改造成基于质粒的技术,并通过去除许多基本基因和分离病毒成分而进行安全修改。请继续阅读用于制造这些载体的病毒的简要描述,以及定义构成病毒载体系统的质粒中发现的主要元素的表格。

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病毒载体类型188完整比分直播

在许多病毒中,只有一个子集是实验室常用的,我们将讨论三种最普遍的病毒:逆转录病毒、慢病毒和腺相关病毒。

Gamma-retrovirus和慢病毒

逆转录病毒是一种RNA病毒,它使用逆转录酶来制造DNA原病毒,可以整合到宿主的基因组中。科学家们常用的逆转录病毒有两种:伽马逆转录病毒(许多次简称为“逆转录病毒”)和慢病毒。从这两个属,研究最多的类型是分别是小鼠白血病病毒(MLV)和人类免疫缺陷病毒1 (HIV-1)。由于这些病毒密切相关,它们的生命周期和所需的组件基本上是相同的,尽管在序列级别确实存在差异。这意味着含有病毒特异性成分(如ltr或结构蛋白)的质粒是不可互换的;然而,其他更普遍的病毒成分,如异种包膜或转录后调控元件可以跨任何系统使用。逆转录病毒和慢病毒之间最显著的区别是,慢病毒可以感染正在分裂的和未分裂的细胞,而逆转录病毒仅局限于细胞分裂。

腺相关病毒

腺相关病毒或AAV是一种感染人类和其他一些灵长类动物的细小病毒,但目前还不知道它会导致疾病。如果AAV仅用于感染人体细胞,则其稳定性较好整合在一个特定的染色体位点,作为其溶源性生命周期的一部分;而加入辅助病毒如腺病毒或含有特定病毒蛋白E1A、E1B、E2A、E4、VA的辅助质粒会使AAV进入裂解循环并进行复制。AAV至少有11种不同的血清型,可能还会发现更多。研究和实验中使用最多的血清型是AAV2;然而,包括物种和细胞类型在内的许多因素可能使其他血清型更受欢迎。

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常见病毒载体成分

在开发病毒载体时,科学家们力争实188完整比分直播现以下几个特点:低风险、高表达、大有效容量、感染目标细胞的能力、不产生宿主免疫反应、易于在实验室开发/使用。在科学家所使用的几乎所有病毒表达系统中,n不重要的组件被剥离,剩下的天然基因被分散在多个质粒上以确保安全性。的选择如何划分元素取决于是否需要提供组件在独联体(在同一质粒上)或在反式(在一个单独的质粒上)作为插入。下表列出了在病毒载体系统中最常见的一些成分。

逆转录病毒和慢病毒元素:

元素 质粒类型 提供吗? 目的
当你 转移 在独联体 长末端重复;在逆转录病毒前病毒的两侧发现U3-R-U5区域(见下文)。ltr之间的克隆容量为~8.5kb,但大于~3kb的插入的封装效率较低。
U3 转移 在独联体 独特的3 ';在病毒基因组RNA的3 '端区域(但在原病毒的5 '和3 '端都存在)。包含病毒基因组RNA转录激活所必需的序列。
R 转移 在独联体 在逆转录/慢病毒载体的5 '和3 ' ltr中都发现了重复区域。188完整比分直播Tat依附于这个区域。
U5 转移 在独联体 独特的5 ';在病毒基因组RNA的5 '端区域(但在原病毒的5 '和3 '端都存在)。
5 '当你 转移 在独联体 作为RNA pol II启动子。根据定义,转录本开始于R的开头,被封顶,然后继续到U5和原病毒的其余部分。第三代载体使用带有组成启动子的杂交5'LTR,如CMV或RSV。
焦油 转移(第二代) 在独联体 Trans-activating响应元素;位于LTR的R区,作为Tat的结合位点。
3 '当你 转移 在独联体 通过在R序列后添加poly a通道终止由5 ' LTR开始的转录。
cPPT 转移 在独联体

中央polypurine束;前病毒DNA合成的识别位点。我增加转导效率和转基因表达。

Psi(Ψ) 转移 在独联体 核衣壳包装的RNA靶点。
RRE 转移 在独联体 转速响应元素;与Rev蛋白结合的序列。
WPRE 转移 在独联体 土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件;通过增加核输出来刺激转基因表达的序列。
呕吐 包装 在反式 含有基质、衣壳和核衣壳成分的慢病毒粒子的前体结构蛋白。
波尔 包装 在反式 含有逆转录酶和整合酶组件。
牧师 包装(在单独的质粒从Gag/Pol在第三代系统) 在反式 结合到未剪接和部分剪接转录本中的Rev Response Element (RRE),以促进核输出。
包装(第二代) 在反式 Trans-activator;结合TAR来激活LTR启动子的转录。
VSVG 信封 在反式 水疱性口炎病毒G糖蛋白;广向性包膜蛋白用于拟型大多数慢病毒载体。188完整比分直播

请参阅我们之前的帖子"慢病毒质粒问题解答“或者我们慢病毒FAQ页面获取有关慢病毒载体的更详细信息,包括生物安全常见问题。188完整比分直播

AAV元素:

元素 质粒类型 提供吗? 目的
ITR 克隆 在独联体 末端反向重复;145基地。itr的对称性对于AAV基因组的高效增殖是必需的。形成一个t形发夹,作为病毒DNA复制的起点。包含包装所需的D区域。itr之间的克隆容量约为4kb。
代表 包装 在反式 用四种可能的变体包装蛋白质: Rep78、Rep68、Rep52和Rep40;对基因组复制和整合都是必要的。来自大多数血清型的Rep蛋白可以与任何ITR血清型互换使用*
包装 在反式 具有三种变异的结构衣壳蛋白:VP1、VP2和VP3;VP1具有磷脂酶A2活性,这可能是从晚期核内体释放AAV粒子所必需的。VP2和VP3对于正确的病毒粒子组装至关重要。确定血清型/病毒倾向。

* AAV5除外,它需要AAV5 Rep和AAV5 itr进行包装。


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