病毒是细胞内的寄生虫,也是遗传信息的自然载体。因此,它们是基因工程的极好工具。有几种不同的病毒载体可供选择,例如-逆转录病毒、慢病毒、188完整比分直播腺病毒和腺相关病毒(AAV)。如果你想知道哪种病毒最适合你的实验看看这个病毒载体的概述.
逆转录病毒科或逆转录病毒科的病毒,包括γ -逆转录病毒和慢病毒属,具有永久整合到宿主基因组的独特能力,从而使基因长期稳定表达。γ -逆转录病毒载体来188完整比分直播源于Moloney小鼠白血病病毒(MoMLV,MMLV、MuLV或MLV)或小鼠干细胞病毒(MSCV)基因组,而慢病毒载体来源于188完整比分直播人类免疫缺陷病毒(艾滋病毒)基因组。
为了研究目的,逆转录病毒载体已经发展成“分裂载体系统”,188完整比分直播通过分离病毒基因和跨多个质粒的转基因表达。最常用的病毒载体系统由单独的包膜和包装质粒以及转移质粒组成。这一概念确保了在实验中使用这些载体时的安全处理和表达。
逆转录病毒188完整比分直播载体构成了一个大型工具箱,供研究人员用于(除其他外)基因传递、产生多能干细胞和开发单基因疾病的基因疗法。此外,逆转录病毒载体可以通过传递shRNA或miRNA来调节基因表达。不断扩大的CRISPR领域广泛使用逆转录病毒递送系统,尤其是慢病毒载体载体CRISPR汇聚库这使得在全基因组实验中对数千个基因进行功能性筛选成为可能。
-逆转录病毒和慢病毒载体系统
γ-逆转录病毒载体具有188完整比分直播相对较高的转导效率,但与慢病毒载体相比,其传染性仅限于分裂细胞。在我们的网站上找到使用伽马逆转录病毒载体的技巧Gamma-retrovirus指南并找到流行的包装和γ-逆转录病毒包膜质粒在这里.
慢病毒载体188完整比分直播是非常通用的工具,因为它们能够转导分裂和非分裂细胞。关于慢病毒成分以及第二代和第三代慢病毒系统的更详细描述,请参见我们的慢病毒指南.列出了流行的包装和慢病毒包膜质粒在这里. 请注意,慢病毒和γ-逆转录病毒使用相同的基因产物进行包装,但是,这些蛋白质的亚型以及病毒LTR不同。因此,慢病毒和γ-逆转录病毒包装质粒不能互换。普通包膜质粒,如VSV-G,可在两个系统中使用。
下面我将简要介绍几种常用的γ -逆转录病毒和慢病毒载体,它们被用于基因调控、感兴趣基因表达、敲除和筛选。188完整比分直播Addgene有很多有用的病毒载体:188完整比分直播跟着我们病毒载体博客帖子有关在实验中使用逆转录病毒载体的最新存款、协议和提示的更新。188完整比分直播
Gamma-retro188完整比分直播viral向量
表达你的兴趣基因
用嘌呤霉素选择克隆和表达你感兴趣的基因的逆转录病毒载体。创建pBabe的一位科学家写道它的名字是如何产生的在这里.
RNAi的克隆与表达
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是RNA介导的基因沉默机制。科学家可以表达sirna来引导细胞RNAi机制沉默靶基因。这个空的MuLV向量温伯格实验室使研究人员能够在哺乳动物细胞中表达他们选择的sirna。了解更多关于用于RNAi的哺乳动物shRNA工具!
Cre-Lox技术
这个逆转录病毒载体来自计的实验室编码GFP和Cre重组酶。的Cre-lox系统是一种可用于诱导位点特异性重组事件的技术,广泛应用于小鼠转基因领域。实验用途包括:crea依赖的基因表达、基因敲除和选择标记去除。
CRISPR技术
在哺乳动物基因敲除的小鼠干细胞逆转录病毒启动子控制下,表达一种无催化活性(死亡)的人类密码子优化Cas9。矢量由Qi实验室.了解更多关于用于转录抑制的CRISPR质粒.
逆转录病毒质粒设备
的温斯洛实验室条形码文库由96个逆转录病毒质粒(基于小鼠干细胞病毒,MSCV)组成,每个质粒具有唯一的6个核苷酸条形码。此集合可用于在活的有机体内对小分子文库进行表型筛选,并可与高通量测序相结合,对经感兴趣化合物预处理的细胞进行多重分析。
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表达你的兴趣基因
你可以克隆你感兴趣的基因到这个四环素诱导的,第三代慢病毒载体骨干施氏实验室.你可以找到更多的慢病毒表达载体(空主干)在这里
克隆和表达新的shRNA序列
这个质粒已经被RNAi财团,也被称为遗传扰动平台,以产生它们的shRNA文库支持对哺乳动物基因组的功能性研究,以揭示基因改变如何导致表型变化。这个质粒有一个1.9 kb的填充序列,可以用你选择的shRNA序列删除和替换。关于如何使用pLKO的更多信息和详细协议。可以找到1个向量在这里.
Cre-Lox技术
这是一个慢病毒载体Tyler Jacks博士.它携带CRE重组酶与嘌呤霉素耐药盒。
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CRISPR技术
这是第三代慢病毒主干张实验室表达链球菌Cas9和gRNA磁带。它可以产生比原来高10倍滴度的慢病毒颗粒lentiCRISPR v1.
来自Zhang实验室的特别说明:我们正在不断改进CRISPR试剂。请检查www.genome-engineering.org索取最新资料。
检查我们的CRISPR指南和博客了解更多关于CRISPR和基因组编辑领域的最新进展。
慢病毒质粒设备
MuLE(多重慢病毒表达)系统有助于将多重基因改变同时引入哺乳动物细胞。来自Frew实验室由91个构建块输入载体和5个慢病毒目的载体组成。这些载体可诱导组合组成型或诱导型基因过度表达、敲除(shRNA、miR-30-shRNA)、突变/编辑(CRISPR-Cas9)或缺失(Cre),以及用于细胞分析和动物成像研究的荧光或酶报告基因的表达。通过感染单一嗜生态或双嗜性骡慢病毒同时改变多个基因的能力提供了显著的遗传能力,并允许在哺乳动物细胞和组织中进行高通量遗传调节研究。
这种模块化和灵活的系统可用于构建复杂的慢病毒,用单一病毒感染来修饰哺乳动物细胞。
参考文献
等。伽玛病毒载体:生物学188完整比分直播、技术与应用。2011年病毒。。PubMedPMID:21994751.公共医学中心PMCID: PMC3185771.
Merten OW等。慢病毒载体的生产。188完整比分直播生物医学进展。2016。PubMedPMID:27110581.公共医学中心PMCID:pmc480361.
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