抗体是检测细胞和组织中感兴趣的蛋白质的首选工具。尽管抗体生产已经很成熟，但单个实验室也很难完成这一过程。的nanobody基于RANbody平台Sanes——实验室克服了这一限制，允许灵活的设计和小规模生产的抗体。
抗体的问题
- 传统的抗体是一种不可再生的试剂它们的生产需要动物牺牲，因为它们是动物衍生产品，所以在活动中可能有很多不同的品种。
- 〇没有基因标记由于抗体是在动物体内产生的，而不是通过重组DNA，因此它们不能进行基因标记，而是在纯化后与报告细胞(如荧光染料、HRP等)结合。
- 单个实验室很难制造抗体杂交瘤提供了一种单克隆抗体的替代和可再生来源，但它们的生产很费力，共享成本很高。
什么是RANbody?
RANbody是一种融合reporter一个和一个n另身体编码在质粒上．一个nanobody是一种~150氨基酸的单结构域抗体。为了创建RANbody, Yamagata等人使用了之前发表的纳米体序列，靶向以下抗原:GFP、RFP、组蛋白H2A2B和肌动蛋白结合蛋白gelsolin，但任何纳米体序列都可以用来制造RANbody。ranbody在293T细胞中表达，并由于其IgGκ信号肽序列而由细胞分泌，因此易于从细胞培养基中提取。他们的His标签允许进一步的净化，如果需要的话，但这对他们的使用不是必需的。
每个RANbody都可以被两个不同的标签检测到:一个报告标签和一个HA标签。该记者有三个品种:辣根过氧化物酶(HRP)、意大利面怪兽(Spaghetti Monster)和鸡IgY域，wh下面将更详细地讨论。HA标签可以用抗HA抗体染色，作为独立于报告器的备用检测手段。唯一需要注意的是，HA染色比报告染色弱。
为你的RANBody挑选合适的记者
虽然这三种报告都能对培养的细胞和组织切片进行染色，但有些报告更适合于特定的应用。请继续阅读以了解关于每个报告器的更多信息，或查看表1以了解摘要。
合
合标记RANbodies不需要二次抗体检测。取而代之的是用酪胺信号放大来检测。当辣根过氧化物酶(HRP)将荧光标记的酪胺分子转化为高度活性的自由基时，酪胺信号放大发生，然后这些自由基与邻近的残基共价连接，从而用荧光标记它们。HRP RANbody染色比一抗/标记二抗染色信号增加≥10倍，比固有荧光信号增加≥100倍。增加的信号可能是由于低背景和更好的穿透样本，因为ranbody的体积比抗体小。
多个hrp - RANbody的染色无法区分，因为它们产生相同的信号，所以一次只能使用一个HRP-conjugated RANbody。如果样品被剥离，可以用两个HRP ran小体顺序染色。然而，hrp - ranbody与大多数多标记免疫组化协议兼容，其中直接标记一抗或一抗/标记二抗用于检测附加抗原。
意大利面条怪物
意大利面条怪物是高度抗原标记，有10个HA或10个MYC标记构建在GFP支架中。一些GFP纳米体在被标记为意大利面怪物时染色很差，因为它们能识别GFP支架本身。幸运的是,GFP1 HA意大利面怪兽RANbody不能识别支架，对检测GFP很有用。意大利面怪兽标记的ranbody可以用标记的抗HA或- myc抗体检测，也可以用抗HA或- myc一抗和标记的二抗检测。虽然直接标记抗ha或-MYC抗体的意大利面怪兽RANbody检测的敏感性不如HRP RANbody检测，但它的敏感性近似于用标准一抗/标记二抗检测相同抗原。
鸡IgY
该RANbody报告由两个鸡IgY域组成。鸡IgY结构域对组织的多色染色特别有用，因为它们与常用的抗啮齿动物或-兔二抗的交叉反应性有限。鸡IgY RANbodies很容易被标记的抗鸡抗体检测到。鸡IgY RANbody检测的灵敏度不如HRP RANbody检测，但与标准一/二抗抗原检测的灵敏度大致相当。
表1:HRP、意大利面怪兽和鸡IgY域RANbody记者的主要特征总结。
| 记者 | 检测方法 | 使用 | 优点 | 缺点 | 抗原 |
| 合(P) | 辣根过氧化物酶(HRP)的酰胺信号放大 | 培养细胞和组织切片染色 放大荧光蛋白(即GFP、RFP)的微弱信号 |
检测不需要抗体 用辣根过氧化物酶(HRP)底物酶切检测RANbody 比用一抗或标记二抗检测抗原更敏感。与多标记协议兼容，当其他抗原用标记一剂或一剂/标记二剂检测时 |
组织上的酶反应可能很麻烦 酪胺试剂可能很昂贵 一次只能用一个HRP-RANbody染色吗 |
绿色荧光蛋白，招标书，H2A2B，Gelsolin |
| 意大利面怪物:HA (H)或Myc (M)版本 | 标记的抗ha或-Myc抗体 | 培养细胞和组织切片染色 | 当用标记的抗ha或-MYC抗体检测时，其灵敏度近似于用标准的一剂/标记的二剂检测抗原 | 不如HRP-RANbody染色灵敏 需要二次抗体染色 |
|
| 鸡IgY (Y) | 标记抗鸡IgY抗体 | 培养细胞和组织切片染色 | 非常适合多色染色组织，因为它不会与抗鼠或抗兔交叉反应 用抗鸡IgY抗体检测，与用标准一抗/标记二抗检测抗原的灵敏度差不多 |
不如HRP-RANbody染色灵敏 需要二次抗体染色 |
绿色荧光蛋白，招标书，H2A2B |
你们准备好开始制作自己的ranbody了吗?太棒了!可以找到Yamagata等的所有RANbody质粒在这里。
找不到对抗你最喜欢的蛋白质的RANbody吗?没烦恼!随着越来越多的纳米体被开发出来，将会有更多的纳米体变成ranbody。如果你知道一个纳米体可以成为一个有用的RANbody，考虑在下面的评论中留下它的序列的链接。
参考文献
(2018)。报告-纳米体融合(RANbodies)是一种多功能、小而敏感的免疫组化试剂。《美国国家科学院学报》上。PubMedPMID:29440485．
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额外的资源
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