通过制造自己的有能力的细胞来节省时间和金钱

我们每周都会在阿德金，因此我们需要节约成本和时间。我们通过制造我们自己的有能力的细胞和使用一种鲜为人知的试剂来简化转化步骤。

继续阅读，找到可以在您自己的实验室中使用的协议和提示。

如何制造你自己的有能力的细胞

制造自己的有能力的细胞很容易。如果你需要高效率的转化（例如，如果你正在使用一个库或一个特别低浓度的质粒），你将从购买有能力的细胞中获益。然而，对于大多数日常克隆来说，自制的有能力的细胞可以正常工作。

在线提供了许多制作有能力细胞的协议。此处提供了一些示例以供参考：

• 开放式软件
  • 制备化学活性细胞（方案）
  • 准备电性能电池（协议）

• 无组织实验室
  • 化学活性细胞的制备（方案）
  • 电性能电池的制备（方案）

在Addgene，我们使用混搭！大肠杆菌转化试剂盒和缓冲液组因为使用这种试剂盒制备的细胞可以在没有热休克的情况下转化。详细的协议可通过Zymo Research获得。简言之，我们增长了我们的收入大肠杆菌在LB至log阶段，然后在提供的缓冲液中清洗并重新使用电池。然后将活性细胞等分并储存在-80^o直到我们准备好执行转换。

典型的200mL细菌培养产生20mL活性细胞，当每次反应使用25uL活性细胞时，足以转化800次。我们用LB培养细胞，而不是用酵母培养^商标，因此每次转换的成本不到5美分。

这个协议对我们来说已经好几个月了大肠杆菌菌株，包括DH5alpha、XL1蓝、TOP10、ccdB存活率^商标，及Stbl3^商标.

如何转化质粒DNA

如果您决定使用商业活性细胞，那么最好按照随附的说明进行操作。如果您决定使用上面提供的协议制作自己的有能力细胞，那么您可以在下面找到后续转换协议：

• 开放式软件
  • 转化化学活性细胞（方案）
  • 电穿孔（协议）

• 无组织实验室
  • 化学活性细胞的转化（方案）
  • 电性能电池的改造（协议）

使用Z-主管制备的细胞^商标缓冲区可以很容易地转换，无需热冲击步骤。由于在Addgene执行了大量转换，这将大大节省时间。

如果你正在转化具有氨苄西林耐药性的质粒，你也可以节省自己的时间。将质粒导入细菌后，细菌被释放通常在不含抗生素的液体培养中生长，以给抗生素抗性基因表达时间。然而，如果转化细胞被接种在含有氨苄西林选择的琼脂上，则可以跳过此培养步骤，直接进行接种。

注意事项和提示

• 我们发现，当储存在-80℃时，我们的活性细胞至少可以存活一年^oC

• 对于每一批新的活性细胞，不要忘记做一个阴性对照（在不添加质粒的情况下培养细胞），以确保没有污染。

• 还要进行阳性对照（测试在其他有能力的细胞中转化良好的质粒），以确保你的细胞能够轻易转化。将使用新一批活性细胞获得的菌落数量与使用市售细胞或之前一批自制活性细胞获得的菌落数量进行比较，以确保良好的效率。

想要更多转化细胞的技巧吗？退房我们的转型指南.