这篇文章是由Addgenies Brook Pyhtila和Nicole Waxmonsky共同撰写的
资源共享缩短了从计划实验到执行实验所需的时间。在Addgene,超过120个实验室已经进行了储存CRISPR试剂,包括许多含有grna的质粒(McDade等人,2016年)。这些质粒中包含的许多GRNA已成功用于同行评审的文章中。如果你用CRISPR瞄准你最喜欢的基因,使用其中一种经过验证的gRNA可以节省你制作和测试全新gRNA设计的时间。您现在可以很容易地在我们新策划的验证的gRNA目标序列表.
什么是经过验证的grna ?
适当的目标选择和gRNA设计是CRISPR实验的必要条件。选择过程通常是耗时的,并且不能保证选择的序列将产生有用的gRNA。或者,你可以选择一个已经在CRISPR实验中显示有效的目标序列。
Addgene致力于资源共享,这使我们开发了一个可搜索和可排序的数据表,其中包含经过验证的gRNA序列。在此上下文中验证是指表中列出的每个gRNA都已在已发表的文章中有效使用。这篇博文将作为使用我们已验证的gRNA目标序列表的指南。
免责声明:gRNAs的功效受目标位置、目标序列和模型系统的影响。即使gRNA已被证明在您的系统中起作用,也值得花时间对基因组目标进行测序,以确定是否存在任何序列变异(如snp)。此外,考虑测试针对同一位点的多个grna,以确保它们的效果是特定于该位点的。
经验证的gRNA表中的数据来源于科学家提交的材料,或者他们的gRNA质粒或从一电子表格单独包含已验证的gRNA序列。序列提交对于不是由质粒产生的经过验证的grna是受欢迎的。例如,如果你更喜欢将CRISPR组件作为rnp(核糖核蛋白)因此通常会转录grna体外,你可以把有效grna的序列发给我们,我们会把它们添加到这个列表中。
经过验证的gRNA表的特征
你可以访问这里的数据表.当前表列包括目标基因、物种、序列、Addgene质粒ID(如果我们有一个与gRNA相关的)、应用、cas9物种、PubMed ID和沉积物。的CRISPR应用程序我们目前的数据是:剪切、激活、干扰、可视化、刻痕、纯化、标记、支架、CRISPR-display,和dCas9-FokI。
这张表是合适的和可搜索的,这可以帮助排除您不感兴趣的数据。对于数字列,可以使用数据表标题中的克拉按字母顺序或升序或降序排序。
任何列中的数据都是可搜索的,您可以按数据的任何部分进行搜索。例如,输入'秀丽隐杆线虫”,或“线虫'将过滤要显示的表秀丽隐杆线虫gRNA序列。您还可以通过多个关键字进行过滤,这些关键字之间用一个空格分隔,以获得更具体的内容。例如,为了显示人类系统中用于激活的gRNAs,搜索“sapiens activate”来过滤表格,找到你想要的东西。
使用上面红色高亮的框进行搜索。在搜索时,值得尝试其他名称,特别是基因名称。
如果您发现了一个适用于您的实验的序列,建议您在原始出版物中确认细节和最终的实验结果。当你们开发和确认新的grna时,请考虑提交的序列(还有质粒!)这样,共享资源可以继续增长。
这篇文章由布鲁克·皮提拉和妮可·瓦克斯蒙斯基共同撰写。
工具书类
麦克达德J,北卡罗来纳州瓦克蒙斯基市。新兴CRISPR技术可通过资源共享获得。2016在出版社。
Addgene博客上的额外资源188博金宝官网
- 学习如何设计你的gRNA
- 使用CRISPR软件媒人
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