一世2016年7月，我们启动了病毒服务并开始向世界各地的科学家提供即将使用的母亲和adeno相关的病毒（AAV）。我们只有几个在国内提供的库存物品，但到2016年底，我们将我们的病毒库存扩展到25个慢病毒和25个AAV。这些病毒已分配到20多个国家的200多个包装中。通过这一初步成功，我们将继续提供和扩展这种多样化和有用的工具集合，以便世界各地的研究人员可以加速他们的工作。毕竟，我们喜欢Sayat addgene，生产力是传染性的。

好奇到目前为止，研究人员发现哪些病毒最有用？我们分析了病毒服务上的数字（然后再次分析），以找到2016年最受欢迎的慢病毒和AAV。

2016年的顶级病毒是（请问drumroll)...

最佳慢病毒：Lenticas9-Blast

大多数addgene的慢病毒库存是基于CRISPR工具，但我们确实提供了一些非CRISPR相关病毒制剂. Cas9是大多数CRISPR应用的头条新闻，在用这种病毒转导后，可以从你选择的细胞系中表达。虽然各种Cas9突变体已被设计用于执行独特的编辑任务，但引入双链DNA断裂的经典Cas9核酸酶可从细胞中表达Lenticas9-Blast。

Lenticas9-Blast的目的

LentiCas9 blast是由冯张的实验室在广泛的研究所（Sanjana等人，2014年)。这是一个双载体系统，意味着它通常与第二个载体结合使用，以提供gRNA，如LenticaGuide Puro。替代的单载体系统通常从同一质粒表达Cas9和gRNA。LentiCas9 blast病毒可用于生成表达Cas9的细胞系，然后可用于筛选(使用汇集的CRISPR淘汰图书馆）和个体基因敲门（使用Grna Lentiviruses.）。

将Cas9和gRNA分为两种结构（即，使用双向量系统而不是单向量系统）有几个好处。首先，通常与表达Cas9的慢病毒相关的低病毒滴度将不再携带到gRNA慢病毒中。这意味着，如果您从Addgene接收到慢Cas9 blast慢病毒，您可以将其与在您自己的实验室轻松制备的gRNA慢病毒结合使用。我们提供用于生成自己的Lentivirus的协议和有用提示。其次，你可以使用慢病毒Cas9原发性病毒制剂来创建一个稳定的Cas9表达细胞系，然后将该细胞系与表达各种GRNA的慢病毒进行转导。最好在单克隆Cas9背景中比较表达各种GRNA的表型效应，因为你会有更一致的Cas9表达水平在实验之间和随着时间的推移（与单个矢量系统的单独传输相比）。

使用这种质粒的提示

Cas9表达通常具有细胞毒性，这使得高滴度Cas9慢病毒的产生具有挑战性。当使用lentiCas9 blast生成表达Cas9的细胞时，这种细胞毒性也会导致生长速率的变化。为了确保这种生长速率效应不会混淆您的实验数据，我们建议生成单克隆CAS9表达线在进行屏幕之前或甚至单个基因敲除。

顶级AAV：pAAV-hSyn-DIO-hM4D（Gi）-mCherry

我们目前的AAV库存几乎完全由表达Dreadds的病毒组成布莱恩·罗斯实验室在北卡罗来纳大学，教堂山。这些可用于研究激活特定的细胞类型中的特定信号途径的影响（通常是神经元）。虽然所有这些病毒都很受欢迎，但pAAV-hSyn-DIO-hM4D（Gi）-mCherry包含一个双絮状人毒蕈碱受体4(Gαi加耦合）Dreadd融合给MCHERRY，所有人都在人体Synapsin启动子的控制下。

本AAV的目的

Paav-hsyn-dio-hm4d（gi）-mcherry可用于诱导神经元沉默体外和体内（Krashes等人。，2011年).各种可用血清型（AAV2、AAV5、AAV8）可在不同细胞类型中实现不同的转导和转基因表达模式(Aschauer等人。，2013年）。来自该病毒的HM4D（GI）-mcherry的表达是依赖于CRE的，这意味着一旦注射，Dreadd将仅在表达CRE重组酶的细胞中表达。通常，该特征用于获得转基因动物中的细胞特异性表达，其中CRE表达限于特定的细胞类型。人类Synapsin启动子进一步规定了Dreadd的神经元特异性表达（Kügler等，2003年），然后可以由小分子氯氮平N-氧化物（CNO）排除（Krashes等人。，2011年）。

表达Paav-Hsyn-Dio-HM4D（GI）-mcherry的病毒通常注入小鼠，大鼠或非人的大脑区域。为了激活Dreadd，CNO通过饮用水或静脉内递送。

使用pAAV-hSyn-DIO-hM4D（Gi）-mCherry的提示

在第一次使用此病毒时，Roth Lab推荐事先验证cre表达式使用。实验室另外建议使用抗MCHERRY抗体而不是内源性MCHERRY荧光在固定组织中可视化HM4D（GI） - 频率。

工具书类

1. Aschauer DF，Kreuz S，Rumpel S.在小鼠脑中的转导效率，对抗血清型1,2,5,6,8和9的转导效率，冠状传输分析。Plos一个。2013年9月27日; 8（9）：E76310。PubMed.PMID：24086725.。pmed中央PMCID:PMC3785459。

2。Krashes MJ，Koda S，Ye C，Rogan SC，Adams AC，Cusher DS，Maratos Flier E，Roth BL，Lowell BB.AgRP神经元的快速可逆激活驱动小鼠的进食行为.临床投资杂志.2011年4月；121（4）：1424-8.PubMedPMID：21364278。pmed中央PMCID：PMC3069789.。

3.KüglerS，Kilic E，BährM.人类Synapsin 1基因启动子根据转导区域赋予成年大鼠脑中的腺病毒载体高度神经元特异性的长期转基因表达。基因。2003年2月10日（4）：337-47。PubMed.PMID：12595892。

4.Sanjana NE，Shalem O，Zhang F.用于CRISPR筛选的改进载体和全基因组文库.Nat方法.2014年8月；11（8）：783-4.PubMedPMID:25075903。pmed中央PMCID：PMC4486245。

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